SZDBZ 132-2015 小反刍兽疫抗体检测 竞争酶联免疫吸附法

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1、草。本标准的附录A为规范性附录。本标准由深圳市检验检疫科学研究院提出。本标准起草单位深圳市检验检疫科学研究院深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心。本标准主要起草人阮周曦曾少灵唐金明花群酶标记的羊抗鼠IgG,℃作用h。洗板次,加入底物溶液避光显色~min,用molLHSO终止反应,用酶标仪读数OD值大于或等于。特异性检验与份小反刍兽疫病毒阳性血清进行酶联免疫吸附试验时,应呈阳性反应;与小反刍兽疫病毒阴性血清牛瘟病毒犬瘟热病毒口蹄疫病毒蓝舌病病毒羊痘病毒阳电泳。PI抑制百分率。试剂和材料a包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。PPRV重组N蛋白抗原的检验及贮藏性状PPRV重组N蛋白抗原应为白色固体,无臭无味。浓度测定每瓶用PBS复溶为。用单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化指导性技术文件SZDBZSZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim入境动物检疫实验样品采集运输和保存规范SNT进行。竞争酶联免疫吸附CELISA试验样品制备试验时,标准阴性血清弱阳性血清阳性血清和待测血清均用稀释液作∶倍稀释。操作方法包被酶标板用包被液按∶稀释抗原,包被孔酶标板,每孔?L,℃作用h或℃包被过夜。洗板取出酶标板弃去液体,每SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法df最后次倒置拍干。封闭每孔加封闭液?L,℃反应h。洗板按。加待测样品和对照血清每份待检血清加孔,每孔?L;每板均设标准阴性血清弱阳性血清和阳性血清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释的单克隆抗体?L,℃反应单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化。

2、洗板按操作。加酶结合物每孔加入∶倍稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG?L,℃反应h。洗板按。加底物液每孔加?L底物液,室温~℃避光反应min。SZDBZ加终止液取出酶标板,每孔快速加入?L终止液。测定OD值在min之内,用酶标仪在nm波长下测定OD值。结果判定计算公式设备恒温摇床;真空冻干机;台式高速离心机;凝胶成像系统;CO恒温箱;多波段酶标仪;洗板机;SZDBZ超声波破碎仪;单孔道多孔道可调微量移液器?L?L?L?L微量滴头;紫外分光光度计。PPRV重组N蛋白抗原的制备种毒为携重组昆虫杆状病毒AcNPVPPRVN株,为携带小反刍兽a包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。d标准血清小反刍兽疫标准阳性血清弱阳性血清阴性血清,由世界动物卫生组织OIE血清各份进行酶联免疫吸附试验时,应呈阴性反应。纯净检验按现行中国兽药典进行检验,应无细菌霉菌支原体污染。贮藏与有效期真空冻干抗原于~℃保存,有效期为个月。PPRV单克隆抗体的制备杂交瘤细胞系分泌抗小反刍兽疫病毒核蛋白的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,由深圳市检验检疫科学研究SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法df单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化指导性技术文件SZDBZSZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim外分光光度计测定在OD和OD波长下的光吸收值,按公式OD计算抗原浓度,蛋白质浓度应不低于?gmL。效价测定每瓶PPRV重组N蛋白抗原用去离子水复溶为,用∶稀释后包被酶标板,每孔?L,℃作用h,洗板次,加入小反刍兽疫单克隆抗体约,℃作用h,洗板次,加入∶稀释的H辣根过氧化物加洗液?L,洗板,共次。最后次倒置拍。

3、清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释式PI待测血清样品平均OD值阴性孔平均OD值。判定标准当PPRV强阳性对照PI值>;≤PPRV弱阳性对照PI值≤;PPRV阴性对照PI值<时,试验成立。则待检样品可按下表判定,可疑样品需重复实验,结果仍为可疑则判为阳性。d标准血清小反刍兽疫标准阳性血清弱阳性血清阴性血清,性对照PI值>;≤PPRV弱阳性对照PI值≤;PPRV阴性对照PI值<时,试验成立。则待检样品可按下表判定,可疑样品需重复实验,结果仍为可疑则判为阳性。待测样品的采集和处理SZDBZ采集血液,室温放置~h,以rmin离心min,分离得到血清。血液采集血清样品保存等操作可按SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法df单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化指导性技术文件SZDBZSZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim疫病毒N基因的FastHTAPPRVN重组质粒转座DHBac,提取杆粒转染sf昆虫细胞获得。由深圳市检验检疫科学研究院构建鉴定保管和供应。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。洗板按操作。加酶结合物每孔加入∶倍稀释的辣根过氧化物酶标记的羊加洗液?L,洗板,共次。最后次倒置拍干。封闭每孔加封闭液?L,℃反应h。洗板按。加待测样品和对照血清每份待检血清加孔,每孔?L;每板均设标准阴性血清弱阳性血清和阳性血清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释考实验室或中国农业部指定实验室提供。e待测血清动物血清℃灭能min。f辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgGHRP标记的羊抗鼠IgG按说明书指定的工作浓度稀释使用。g包被液洗涤液稀释液底物液显色剂终止液配制方法。

4、附录A。h水符合GBT分析实验室级水规格。i可拆孔酶标板。主要器械构建鉴定保管和供应。杂交瘤细胞的培养SZDBZ取冻存的杂交瘤细胞种子细胞,复苏,用含有胎牛血清,HT的IMDM培养基进行复壮培养。fu蚀斑形成单位。rmin转速单位,转分。IMDM伊思柯夫改良培养液。SDSPAGE十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳。PI抑制百分率。试剂和材酶标记的羊抗鼠IgG,℃作用h。洗板次,加入底物溶液避光显色~min,用molLHSO终止反应,用酶标仪读数OD值大于或等于。特异性检验与份小反刍兽疫病毒阳性血清进行酶联免疫吸附试验时,应呈阳性反应;与小反刍兽疫病毒阴性血清牛瘟病毒犬瘟热病毒口蹄疫病毒蓝舌病病毒羊痘病毒阳电泳。PI抑制百分率。试剂和材料a包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。PPRV重组N蛋白抗原的检验及贮藏性状PPRV重组N蛋白抗原应为白色固体,无臭无味。浓度测定每瓶用PBS复溶为。用可拆孔酶标板。主要器械和设备恒温摇床;真空冻干机;台式高速离心机;凝胶成像系统;CO恒温箱;多波段酶标仪;洗板机;SZDBZ超声波破碎仪;单孔道多孔道可调微量移液器?L?L?L?L微量滴头;紫外分光光度计。PPRV重组N蛋白抗原的制备种毒为携重组昆虫杆状病毒AcNPVPPa包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。d标准血清小反刍兽疫标准阳性血清弱阳性血清阴性血清,由世界动物卫生组织OIE式PI待测血清样品平均OD值阴性孔平均OD值。判定标准当PPRV强阳性对照PI值>;≤PPRV弱阳性对照PI值≤;PPRV阴性对照PI值<时,试验成立。则待检样品可按下表判定,可疑样品需重复实验,结果仍为可疑则判为阳性。d标准血清小反刍兽疫标准阳性血清弱阳性血清阴性血清。

5、干。封闭每孔加封闭液?L,℃反应h。洗板按。加待测样品和对照血清每份待检血清加孔,每孔?L;每板均设标准阴性血清弱阳性血清和阳性血清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释VN株,为携带小反刍兽疫病毒N基因的FastHTAPPRVN重组质粒转座DHBac,提取杆粒转染sf昆虫细胞获得。由深圳市检验检疫科学研究院构建鉴定保管和供应。fu蚀斑形成单位。rmin转速单位,转分。IMDM伊思柯夫改良培养液。SDSPAGE十烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝世界动物卫生组织OIE参考实验室或中国农业部指定实验室提供。e待测血清动物血清℃灭能min。f辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgGHRP标记的羊抗鼠IgG按说明书指定的工作浓度稀释使用。g包被液洗涤液稀释液底物液显色剂终止液配制方法见附录A。h水符合GBT分析实验室级水规格。电泳。PI抑制百分率。试剂和材料a包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。PPRV重组N蛋白抗原的检验及贮藏性状PPRV重组N蛋白抗原应为白色固体,无臭无味。浓度测定每瓶用PBS复溶为。用洗板按操作。加酶结合物每孔加入∶倍稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG?L,℃反应h。洗板按。加底物液每孔加?L底物液,室温~℃避光反应min。SZDBZ加终止液取出酶标板,每孔快速加入?L终止液。测定OD值在min之内,用酶标仪在nm波长下测定OD值。结果判定计算公式运输和保存规范SNT进行。竞争酶联免疫吸附CELISA试验样品制备试验时,标准阴性血清弱阳性血清阳性血清和待测血清均用稀释液作∶倍稀释。操作方法包被酶标板用包被液按∶稀释抗原,包被孔酶标板,每孔?L,℃作用h或℃包被过夜。洗板取出酶标板弃去液体,每孔加洗液?L,洗板,共次争酶联免疫吸附CELISA试验附录ASZDBZII前言本标准按照GBT给出的规则。

6、。

7、洗板按操作。加酶结合物每孔加入∶倍稀释的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG?L,℃反应h。洗板按。加底物液每孔加?L底物液,室温~℃避光反应min。SZDBZ加终止液取出酶标板,每孔快速加入?L终止液。测定OD值在min之内,用酶标仪在nm波长下测定OD值。结果判定计算公式设备恒温摇床;真空冻干机;台式高速离心机;凝胶成像系统;CO恒温箱;多波段酶标仪;洗板机;SZDBZ超声波破碎仪;单孔道多孔道可调微量移液器?L?L?L?L微量滴头;紫外分光光度计。PPRV重组N蛋白抗原的制备种毒为携重组昆虫杆状病毒AcNPVPPRVN株,为携带小反刍兽a包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。d标准血清小反刍兽疫标准阳性血清弱阳性血清阴性血清,由世界动物卫生组织OIE血清各份进行酶联免疫吸附试验时,应呈阴性反应。纯净检验按现行中国兽药典进行检验,应无细菌霉菌支原体污染。贮藏与有效期真空冻干抗原于~℃保存,有效期为个月。PPRV单克隆抗体的制备杂交瘤细胞系分泌抗小反刍兽疫病毒核蛋白的特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株,由深圳市检验检疫科学研究SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法df单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化指导性技术文件SZDBZSZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim外分光光度计测定在OD和OD波长下的光吸收值,按公式OD计算抗原浓度,蛋白质浓度应不低于?gmL。效价测定每瓶PPRV重组N蛋白抗原用去离子水复溶为,用∶稀释后包被酶标板,每孔?L,℃作用h,洗板次,加入小反刍兽疫单克隆抗体约,℃作用h,洗板次,加入∶稀释的H辣根过氧化物加洗液?L,洗板,共次。最后次倒置拍。

8、草。本标准的附录A为规范性附录。本标准由深圳市检验检疫科学研究院提出。本标准起草单位深圳市检验检疫科学研究院深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心。本标准主要起草人阮周曦曾少灵唐金明花群酶标记的羊抗鼠IgG,℃作用h。洗板次,加入底物溶液避光显色~min,用molLHSO终止反应,用酶标仪读数OD值大于或等于。特异性检验与份小反刍兽疫病毒阳性血清进行酶联免疫吸附试验时,应呈阳性反应;与小反刍兽疫病毒阴性血清牛瘟病毒犬瘟热病毒口蹄疫病毒蓝舌病病毒羊痘病毒阳电泳。PI抑制百分率。试剂和材料a包被抗原PPRV重组N蛋白表达抗原。b单克隆抗体抗PPRVN蛋白特异性单克隆抗体。c实验动物周龄左右SPF级BALBc雌鼠。PPRV重组N蛋白抗原的检验及贮藏性状PPRV重组N蛋白抗原应为白色固体,无臭无味。浓度测定每瓶用PBS复溶为。用单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化指导性技术文件SZDBZSZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim入境动物检疫实验样品采集运输和保存规范SNT进行。竞争酶联免疫吸附CELISA试验样品制备试验时,标准阴性血清弱阳性血清阳性血清和待测血清均用稀释液作∶倍稀释。操作方法包被酶标板用包被液按∶稀释抗原,包被孔酶标板,每孔?L,℃作用h或℃包被过夜。洗板取出酶标板弃去液体,每SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法df最后次倒置拍干。封闭每孔加封闭液?L,℃反应h。洗板按。加待测样品和对照血清每份待检血清加孔,每孔?L;每板均设标准阴性血清弱阳性血清和阳性血清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释的单克隆抗体?L,℃反应单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化。

9、清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释式PI待测血清样品平均OD值阴性孔平均OD值。判定标准当PPRV强阳性对照PI值>;≤PPRV弱阳性对照PI值≤;PPRV阴性对照PI值<时,试验成立。则待检样品可按下表判定,可疑样品需重复实验,结果仍为可疑则判为阳性。d标准血清小反刍兽疫标准阳性血清弱阳性血清阴性血清,性对照PI值>;≤PPRV弱阳性对照PI值≤;PPRV阴性对照PI值<时,试验成立。则待检样品可按下表判定,可疑样品需重复实验,结果仍为可疑则判为阳性。待测样品的采集和处理SZDBZ采集血液,室温放置~h,以rmin离心min,分离得到血清。血液采集血清样品保存等操作可按SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法df单克隆抗体?L,℃反应h。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。SZDBZ深圳市标准化指导性技术文件SZDBZSZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法DetectionMethodofCometitiveenzymelinkedim疫病毒N基因的FastHTAPPRVN重组质粒转座DHBac,提取杆粒转染sf昆虫细胞获得。由深圳市检验检疫科学研究院构建鉴定保管和供应。SZDBZ小反刍兽疫抗体检测竞争酶联免疫吸附法。洗板按操作。加酶结合物每孔加入∶倍稀释的辣根过氧化物酶标记的羊加洗液?L,洗板,共次。最后次倒置拍干。封闭每孔加封闭液?L,℃反应h。洗板按。加待测样品和对照血清每份待检血清加孔,每孔?L;每板均设标准阴性血清弱阳性血清和阳性血清及稀释液对照各孔,每孔?L。加样完毕,均用振荡器充分振荡混匀,记录加样位置。加单克隆抗体每孔加入∶倍稀释考实验室或中国农业部指定实验室提供。e待测血清动物血清℃灭能min。f辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgGHRP标记的羊抗鼠IgG按说明书指定的工作浓度稀释使用。g包被液洗涤液稀释液底物液显色剂终止液配制方法。

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